各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局：

　　為加強SARS診斷試劑、疫苗以及防治藥物篩選研發(fā)工作的管理，規(guī)范技術(shù)研究及實驗方法，確保研究結(jié)果真實可靠，我局組織制定了《SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點》、《細胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗技術(shù)要求》、《SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求》及《SARS病毒毒株資料登記表》等技術(shù)要求，現(xiàn)予印發(fā)，請從事SARS防治藥物研發(fā)的單位遵照執(zhí)行，并就相關(guān)問題通知如下：

　　一、從事SARS疫苗研究、診斷試劑研制和有關(guān)藥物篩選等工作的單位，在執(zhí)行相關(guān)技術(shù)要求的同時，必須嚴格按照科學(xué)技術(shù)部、衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家環(huán)境保護總局四部局聯(lián)合頒發(fā)的《關(guān)于印發(fā)〈傳染性非典型肺炎病毒實驗室暫行管理辦法〉和〈傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法〉的通知》（國科發(fā)農(nóng)社字〔2003〕129號）要求保存和使用SARS病毒毒株，任何單位不得擅自進行毒株的轉(zhuǎn)讓。因SARS病

　　毒毒株保存或者使用不當(dāng)引起嚴重后果者，將承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。

　　二、各藥物研究開發(fā)單位應(yīng)按照《SARS病毒毒株資料登記表》的要求整理有關(guān)毒株的詳細資料，于2003年7月31日前報中國藥品生物制品檢定所（北京天壇西里2號，郵編100050；聯(lián)系人：董關(guān)木；聯(lián)系電話：010-67058428）。未按規(guī)定要求提交SARS病毒毒株資料的，國家食品藥品監(jiān)督管理局將不受理其研發(fā)制品的注冊申報和審批。

　　三、中國藥品生物制品檢定所接到各單位報送的SARS病毒毒株資料后，應(yīng)及時審核并將審核意見和進行藥物研究用毒種的基本情況，書面報國家食品藥品監(jiān)督管理局。

　　四、請各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局盡快將本通知轉(zhuǎn)發(fā)至轄區(qū)內(nèi)從事SARS防治藥物研究開發(fā)單位。

　　特此通知

　　附件：1．SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點

　　2．細胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗技術(shù)要求

　　3．SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求

　　4．SARS病毒毒株資料登記表

　　國家食品藥品監(jiān)督管理局
二○○三年七月一日

　　附件1：SARS病毒滅活疫苗臨床前研究技術(shù)要點

　　隨著對非典型肺炎的病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷和治療等學(xué)科進行全面深入的研究，在各領(lǐng)域已取得重要進展，尤其是確定了SARS病毒為其病原體，已成功分離到多株SARS病毒，并已驗證其能在Vero細胞和2BS等細胞系中培養(yǎng)增殖，這為研制疫苗提供了基礎(chǔ)和基本條件。但是由于SARS病毒的研究有待進一步深入，疫苗的研制尚存在很多的不確定因素。為使SARS病毒滅活疫苗的臨床前研究工作科學(xué)規(guī)范，特制定SARS病毒滅活疫苗臨床前研究考慮要點。

　　一、毒種

　　研究本疫苗所用的毒種須證明為SARS病毒，如該毒種分離自人體，須提供以下資料

　　（一）病毒株名稱及來源

　　1．名稱

　　2．宿主情況：

　?。?）病人姓名、年齡、性別、民族、家庭住址；

　?。?）發(fā)病地點、發(fā)病日期；

　?。?）收住入院日期、臨床確診日期、實驗室確診日期；

　?。?）病人病程及病人轉(zhuǎn)歸：死亡、痊愈、是否有后遺癥；

　?。?）毒株分離原樣本：

　　咽試子、漱口液、痰液、血液、糞便或尸解標本組織名稱；

　　（6）取樣日期；

　?。?）取樣時病人的病期；

　?。?）取樣地點；

　?。?）病人是否留有恢復(fù)期血清；

　　如有：采血日期（病期）和血清量；

　　鑒于人類咽試子、漱口液、痰液、糞便等樣品難免污染其他外原因子，因此建議盡可能采用病人血液分離的病毒株。

　?。ǘ┒局攴蛛x過程

　　1．用細胞分離病毒，須提供所用細胞名稱、代次、來源和細胞無菌檢測、外原因子檢測等資料；鑒于Vero E6細胞的生物學(xué)特性，用Vero E6細胞分離的SARS病毒不能直接用于疫苗生產(chǎn)用毒種，須將Vero E6細胞的適應(yīng)株重新轉(zhuǎn)適應(yīng)到Vero細胞或二倍體細胞株的毒種方能用于生產(chǎn)，因此建議盡可能使用直接以Vero細胞或二倍體細胞株分離的毒種。

　　2．通過動物分離病毒，須提供所用動物名稱、動物品系、動物級別、動物年齡和制備毒種的動物臟器名稱等資料；如再適應(yīng)到細胞，則還須提供1．項中的6所述的細胞資料。

　?。ㄈ┎《痉蛛x傳代特性

　　樣品處理方法、首次盲傳確證病毒陽性代次、病毒確證檢定方法、每代培養(yǎng)天數(shù)、病毒滴度、滴定方法、動物是否發(fā)病或死亡等資料。

　　（四）毒種建立和保存

　　原始毒種代次、毒種病毒滴度、毒種添加的保護劑的名稱和濃度、毒種存儲條件。

　　毒種批的建立應(yīng)按《中國生物制品規(guī)程》疫苗毒種要求進行，應(yīng)建立原始毒種、主毒種和工作毒種批三級毒種庫，主種子和工作種子批還須有毒種的限定代次的資料，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內(nèi)的生物學(xué)特性與原始毒種一致。

　?。ㄎ澹┒痉N的檢定

　　1．毒種的鑒別試驗：

　　應(yīng)提供檢定方法、檢定日期、檢定結(jié)果等資料，建議采用下述方法進行鑒別試驗：

　　（1）可使用確診為SARS病人的恢復(fù)期高效價血清中和病毒。

　　（2）測定中和前后的病毒滴度。

　?。?）應(yīng)有病毒株的核酸全序列分析的資料，包括序列測定的方案、測定方法和測定結(jié)果，測定結(jié)果應(yīng)附核酸序列圖、推導(dǎo)的氨基酸序列圖、種系發(fā)生樹圖等以進一步證明為SARS冠狀病毒。

　　2．毒種的無菌試驗

　　應(yīng)根據(jù)《中國生物制品規(guī)程》疫苗生產(chǎn)用毒種的要求進行無菌試驗檢查。

　　3．毒種的外源因子檢查

　　應(yīng)用證明為SARS病毒感染的單人份病人血清中和本病毒。完全中和病毒后（如不能一次中和，可用另一病人血清再一次中和后）按下列方法進行動物和細胞檢查。

　?。?）動物試驗法

　　小鼠

　　取15-20g小鼠至少10只，用經(jīng)中和后的病毒懸液，每只腦內(nèi)接種0．03ml，腹腔接種0．5ml.至少觀察21天。解剖所有在試驗24小時后死亡或有患病體征的小鼠，為了檢查病毒感染的證據(jù)，直接肉眼觀察其病理改變，并將有病變的相應(yīng)的組織懸液通過腦內(nèi)和腹腔接種另外至少5只小鼠并觀察21天。如果沒有小鼠表現(xiàn)出病毒感染現(xiàn)象，則病毒種子符合要求。在觀察期內(nèi)至少有80%最初接種的小鼠存活試驗才有效。

　　乳鼠

　　出生后24小時以內(nèi)的乳鼠，至少10只，用經(jīng)中和后的病毒懸液，腦內(nèi)接種0．01ml，腹腔接種至少0．1ml.每天觀察，至少14天。解剖所有在試驗24小時后死亡或有患病體征的小鼠，直接肉眼觀察其病理改變，并取有病變的相應(yīng)的組織和腦、脾制備成懸液腦內(nèi)和腹腔接種另外至少5只小鼠并每天觀察，觀察14天。如果沒有小鼠表現(xiàn)出有病毒感染現(xiàn)象，該病毒種子通過試驗。在觀察期內(nèi)至少有80%最初接種的小鼠存活試驗才有效。

　?。?）細胞培養(yǎng)法

　　·非血吸附病毒檢查

　　中和后的病毒懸液，還應(yīng)分別接種于人源、猴源和生產(chǎn)用的同種不同批的細胞。如果是利用人二倍體細胞生產(chǎn)的，還應(yīng)接種另外一株人二倍體細胞。每種細胞最少接種6瓶，每瓶病毒懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25%.于36±1℃培養(yǎng)，觀察二周，或最后一次收獲病毒液時間檢查是否有CPE出現(xiàn)。未見CPE為陰性。

　　·血吸附病毒檢查

　　于第6-8天和第14天，每種細胞分別各取出2瓶進行血吸附，一瓶放置2-8℃，一瓶放置20-25℃，30分鐘后顯微鏡下觀察，未見血球吸附現(xiàn)象為陰性。

　　特別注意：鑒于我國實驗室條件和所用細胞的不確定因素，用于分離病毒的細胞常常污染支原體，而細胞和病毒一旦污染支原體很難清除，為此，提醒對使用的毒種須高度重視，徹底查清毒種是否確已污染支原體，以免所選毒種不符合生產(chǎn)疫苗用毒種，浪費人力、物力、時間和資源。

　　4．毒種的病毒滴度

　　鑒于目前的研究資料顯示，SARS病毒在Vero細胞中的復(fù)制滴度一般可達108，在二倍體細胞中為106左右，用于疫苗研究的毒種應(yīng)分別達到上述要求。

　　5．毒種免疫原性檢查

　　鑒于目前尚無測定疫苗免疫原性的有效方法和標準，建議以實驗性滅活疫苗（即用已建立的毒種庫制備的滅活病毒液）單次或多次免疫動物后采血清測定中和抗體滴度，測定方法應(yīng)為蝕斑形成減少法或細胞病變抑制法，可能時應(yīng)對所測抗體的種類進行分析。用于中和抗體測定的病毒株應(yīng)為非同源株，免疫用動物可考慮家兔、小鼠、豚鼠或其他敏感動物。如有條件時也可測定疫苗的ED50

　　6．疫苗候選株病毒的純化問題

　　新分離的病毒往往是群體病毒毒種，難免存在不同特性的病毒，如毒種病毒滴度和免疫原性未達要求，必要時可考慮用終末稀釋法或蝕斑形成法挑斑反復(fù)多次純化。滅活疫苗的研制，如毒種病毒滴度和免疫原性能達到基本要求，可用現(xiàn)有毒種直接制備實驗性疫苗，無須純化。

　　7．毒種的其他檢定

　　按《中國生物制品規(guī)程》疫苗生產(chǎn)用毒種的要求進行

　　二、疫苗生產(chǎn)用細胞

　　鑒于目前SARS病毒對各種細胞的敏感性研究，以Vero E6細胞最好，Vero細胞和二倍體細胞次之。但Vero E6細胞不能用于生產(chǎn)，可選擇Vero細胞、和/或二倍體細胞進行研究。

　　Vero細胞、二倍體細胞均為傳代細胞，因此須建立三級細胞庫。這兩種細胞建立細胞庫和各細胞庫的各項檢定應(yīng)按《中國生物制品規(guī)程》“生物制品生產(chǎn)用動物細胞制備及檢定規(guī)程”項下的相應(yīng)要求進行。

　　Vero細胞是由非洲綠猴腎建立的傳代細胞系，至170代以后已有明顯的致瘤性，一般使用的疫苗生產(chǎn)終末安全代次為160代以前，建議使用Vero細胞研制疫苗的機構(gòu)應(yīng)注意該細胞的資料。

　　三、生產(chǎn)工藝研究

　?。ㄒ唬┮呙缭荷a(chǎn)工藝的研究

　　1．生產(chǎn)工藝的主要技術(shù)參數(shù)

　?。?）病毒與細胞的接種比例，MOI的最佳參數(shù)。

　?。?）細胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)的最佳溫度、培養(yǎng)時間和收獲時間。

　?。?）病毒液的收獲

　　鑒于Vero作培養(yǎng)基質(zhì)時，后續(xù)純化工藝去除細胞DNA時的困難，因此建議不作細胞凍化以提高病毒收獲的做法。

　?。?）滅活或裂解條件及滅活效果的驗證

　　鑒于SARS病毒的強感染和強傳播特性，滅活劑的選擇和滅活效果的驗證尤為重要，建議如下：

　　·滅活劑

　　根據(jù)其他疫苗的滅活經(jīng)驗，一般情況下可采用甲醛、β-丙內(nèi)酯或其他有效的滅活劑，如選擇甲醛，其濃度、滅活的作用時間、作用溫度、pH等條件對疫苗的抗原的活性具有較大的影

　　響，在研究中應(yīng)引起注意；

　　如用β-丙內(nèi)酯應(yīng)使用95%以上濃度的新試劑，β-丙內(nèi)酯保存時間過長引起自身聚合，影響滅活效果。β-丙內(nèi)酯由于能在疫苗液體中完全水解，不必考慮在成品疫苗中的殘留，因此可考慮在純化前低劑量預(yù)滅活一次，提高生產(chǎn)工序時的安全性，在純化后再滅活一次以確保完全滅活。

　　·滅活效果的驗證

　　提供病毒滅活驗證的詳細資料。可采用敏感細胞Vero E6盲傳3代，每代用直接免疫熒光驗證無活病毒。

　?。?）病毒液的濃縮和/或活性抗原的提取純化，可考慮用膜過濾法濃縮和柱層析法或區(qū)帶離心法純化或其他有效方法。建議參照其他純化疫苗的要求，對疫苗的總蛋白含量進行控制。

　?。?）佐劑

　　目前能用于疫苗的佐劑僅為鋁佐劑，而鋁佐劑通常使疫苗產(chǎn)生的抗體滯后，且增加注射局部的副反應(yīng)機率。如疫苗的抗原量能滿足免疫的需要，建議不加佐劑。

　　2．滅活疫苗的安全性（免疫感染增強作用）

　　鑒于呼吸道病毒感染的疫苗預(yù)防（麻疹病毒、呼吸道合胞病毒等）易產(chǎn)生滅活疫苗導(dǎo)致免疫感染增強的病理反應(yīng)，因此，本滅活疫苗須排除免疫感染增強作用的潛在危險，為本滅活疫苗的研究、實驗和今后的安全使用提供依據(jù)。

　　但是目前沒有明確的實驗動物模型可以驗證有無免疫感染增強作用，為此建議： 可用猴體接種滅活疫苗后再攻擊SARS病毒，一定時間后測定猴體是否產(chǎn)生病毒血癥、臟器是否減少或無病毒抗原、以及作組織病理學(xué)和免疫病理學(xué)等檢查，可以得到初步的證據(jù)。另外也可考慮用家兔、小鼠等別的動物進行免疫感染增強作用的初步驗證。

　　四、生產(chǎn)的安全性問題

　　鑒于SARS病毒的強傳播和強感染性的生物學(xué)特性，生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴格按活病毒和滅活后兩部分分開進行，活病毒操作區(qū)必須在P3以上生物安全條件下進行，嚴格執(zhí)行國家的有關(guān)規(guī)定。

　　五、其他

　　1．按我國《藥品注冊管理辦法》中預(yù)防用生物制品的技術(shù)要求完成相關(guān)的研究。

　　2．本技術(shù)要點將根據(jù)對SARS研究的進展情況適時進行修訂。

　　附件2：細胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗技術(shù)要求

　　新近發(fā)現(xiàn)的非典型肺炎的病原SARS病毒，目前尚沒有理想的動物模型可用于對抗SARS病毒藥物的篩選。為此用細胞模型篩選研究抗SARS病毒的藥物，對評價藥物抗病毒活性或效果具有重要提示價值。為規(guī)范細胞模型抗SARS病毒藥物的篩選研究，制定本技術(shù)要求。

　　本技術(shù)要求適用于化藥、中藥、生物制品等擬用于SARS治療或預(yù)防藥物（不包括預(yù)防用疫苗），并將根據(jù)SARS病毒學(xué)研究的進展適時修訂。

　　一、試驗材料要求

　?。ㄒ唬┎《?/p>

　　1．毒株：應(yīng)采用SARS流行期臨床分離且經(jīng)相關(guān)部門確證的SARS病毒毒株（建議選用2-3株）。

　　2．毒種庫：試驗前將病毒先在敏感細胞上傳數(shù)代，增加毒力，待毒力穩(wěn)定后，收獲病毒分裝一定數(shù)量的小管，在-80℃低溫冰箱或液氮冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

　　3．檢定：毒種庫毒種須經(jīng)外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗，每次試驗取一支，不得回凍再用于篩選。

　?。ǘ┘毎?/p>

　　1．細胞株：選用對SARS病毒敏感的傳代細胞株，如Vero E6、2BS細胞等。

　　2．細胞庫：收集大量培養(yǎng)的細胞分管液氮凍存以保留足夠的

　　傳代細胞。試驗前先復(fù)蘇細胞傳數(shù)代，使培養(yǎng)細胞生長旺盛穩(wěn)定后，

　　開始接種細胞培養(yǎng)板進行試驗。

　　3．檢定：細胞庫細胞須經(jīng)外源因子檢測合格后方可用于篩選試驗，每次試驗取一支，不得回凍再用于篩選。

　?。ㄈ┐郎y藥物

　　試驗前編號登記、標明藥名、來源、批號、重量或體積、溶媒、溶解度、穩(wěn)定性和保存條件等。

　　（四）其他

　　本試驗研究必須在生物安全3級試驗室進行，毒種的管理使用必須符合國家的有關(guān)規(guī)定。

　　二、篩選試驗

　　（一）預(yù)備試驗

　　1．病毒毒力測定

　　選擇敏感細胞用于病毒培養(yǎng)，加入10倍系列稀釋的5-7個濃度的病毒培養(yǎng)液。適宜條件下培養(yǎng)后每天用倒置顯微鏡觀察細胞病變（CPE）或用MTT染色法觀察細胞存活狀態(tài)，用Reed-Muench法計算病毒半數(shù)感染劑量（TCID50），每濃度設(shè)4個復(fù)孔，重復(fù)實驗確定毒力。

　　2．藥物對細胞毒性的測定

　　以細胞病變或MTT染色法為觀察指標，前法可觀察3-5天，每個藥物至少設(shè)4個濃度進行測定，用Reed-Muench法求出對細胞無毒的最大濃度（TD0）和半數(shù)中毒濃度（TD50）。每濃度藥液至少3管，重復(fù)試驗3次。

　　（二）篩選試驗

　　經(jīng)預(yù)試驗求出病毒的TCID50和藥物的TD0后，在SARS病毒的敏感細胞模型上進行抗病毒活性篩選，適宜的培養(yǎng)液及培養(yǎng)條件培養(yǎng)。96孔板，細胞長成單層后，每孔加100μl （100 TCID50左右）病毒感染，吸附2小時后，傾出病毒。然后加入待測藥物，只做一個最大無毒濃度（TD0），4個孔。試驗設(shè)病毒對照、細胞對照及陽性藥物對照。以病毒對照孔出現(xiàn)病變達75%以上（即4+時），可終止試驗。

　　倒置顯微鏡觀察對細胞的致病變作用（CPE），將給藥孔與病毒對照孔進行比較，如最大無毒濃度藥物無抑制病毒CPE作用則不繼續(xù)做，如有抑制作用須進行補充試驗。

　?。ㄈ┭a充試驗

　　最大無毒濃度（TD0）的藥物如有抗病毒作用，應(yīng)進行補充篩選試驗。模型和培養(yǎng)條件同上。

　　試驗設(shè)藥物試驗組、病毒對照組及細胞對照組。每孔加入100TCID50左右病毒感染，吸附2小時，傾出病毒。選用最大無毒濃度（TD0）藥液，2倍或者10倍系列稀釋的5-7個濃度，每濃度4孔，每孔100μl，分別加入未感染或感染的細胞培養(yǎng)孔內(nèi)，每天用倒置顯微鏡觀察，記錄細胞病變程度。當(dāng)病毒對照病孔病變達4+時可終止試驗，判定藥物的效果。試驗須重復(fù)3次。

　　用CPE法，對各組進行比較。

　　用Reed-Muench法計算半數(shù)有效濃度（IC50）及治療指數(shù)（TI）。

　　TI = 半數(shù)中毒濃度（TD50）/半數(shù)有效濃度（IC50）

　　以上初篩及進一步藥效評價方法一般是針對治療性給藥（病毒感染細胞后給藥）的藥物；若為預(yù)防性藥物，則建議相應(yīng)調(diào)整給藥與感染的順序（病毒感染前給藥，病毒感染時及感染后均應(yīng)洗去藥物），以考察其預(yù)防效果。

　　四、結(jié)果評價

　　鑒于目前SARS疾病的理想動物模型尚未建立，且體內(nèi)外藥效學(xué)結(jié)果的相關(guān)性尚不明確，體外藥效學(xué)的試驗結(jié)果僅是評價藥物療效重要參考指標。在這種情況下,盡量提供更多的反映藥物體內(nèi)外相關(guān)性的研究資料將有助于進一步的評價；如在可能的情況下,進行藥代動力學(xué)研究,考察體內(nèi)藥物濃度能否達到IC50及維持時間等。另外，還應(yīng)結(jié)合受試藥物的安全性，對其有效性進行綜合評價。

　　附件3：SARS診斷試劑生產(chǎn)研制技術(shù)要求

　　由于對引發(fā)嚴重急性呼吸道綜合癥（簡稱SARS）的病原－新型冠狀病毒的研究尚有待進一步深入，診斷試劑的研究仍存在很多不確定因素。為規(guī)范SARS診斷試劑的研究，特制訂本技術(shù)要求。

　　一、基本要求

　?。ㄒ唬氖耂ARS體外生物診斷試劑研發(fā)的機構(gòu)應(yīng)當(dāng)具有與試驗研究項目相適應(yīng)的人員、場地及設(shè)施等條件。

　?。ǘ㏒ARS病毒的分離、管理、使用及其保藏、運輸、處理等必須按照國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

　?。ㄈ┡R床研究必須符合GCP的原則及相關(guān)的技術(shù)要求。

　　二、原材料

　?。ㄒ唬┛贵w檢測試劑

　　1．抗原：由于對新型冠狀病毒的基礎(chǔ)研究尚有待深入，為此所用抗原應(yīng)盡可能選擇檢測譜廣的抗原，如純化的全病毒抗原。

　　2．抗原來源明確，質(zhì)量指標必須達到診斷試劑研制用的要求。

　　3．病毒株須經(jīng)鑒定并確證。

　　4．其他輔助材料必須符合相關(guān)的技術(shù)要求。

　　5．包被用全病毒抗原或陽性質(zhì)控血清須進行滅活驗證研究。

　　6．陽性質(zhì)控血清須進行中和試驗驗證研究。

　　（二）核酸檢測試劑

　　1．引物的設(shè)計須符合核酸檢測設(shè)計的要求。

　　2．靶序列需進行與其他病毒同源性的分析對比研究。

　　3．檢測試劑須設(shè)定合理的內(nèi)標和外標。

　　4．試劑須設(shè)置抗污染的特定措施。

　　5．?dāng)U增產(chǎn)物須進行確證研究。

　?。ㄈ┛乖瓩z測試劑

　　1．可采用單克隆或者多克隆抗體的雙抗體檢測法。

　　2．抗體須經(jīng)特異性交叉反應(yīng)測定。

　　三、工藝與生產(chǎn)

　　（一）工藝過程須進行優(yōu)化試驗研究。

　　（二）生產(chǎn)人員須經(jīng)專業(yè)知識培訓(xùn)，了解有關(guān)SARS的基本知識。

　?。ㄈ┥a(chǎn)車間須符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。

　　四、質(zhì)量控制

　?。ㄒ唬?yīng)制定嚴格的原材料質(zhì)量標準要求，保證批與批間的一致性。

　?。ǘ?yīng)研究制定企業(yè)質(zhì)量標準及參考品，用于對試劑的質(zhì)量控制。

　　（三）試劑盒須進行成品性能的評價。

　　五、臨床研究

　?。ㄒ唬┭芯坑脴悠繁仨氂忻鞔_、詳細的臨床資料，包括病程等；樣品中須有一定數(shù)量的陽轉(zhuǎn)系列標本。

　?。ǘ╉毥?jīng)過至少兩家臨床研究單位進行臨床考核，出具臨床考核報告并加蓋臨床考核單位有效公章。

　?。ㄈ┭芯坑迷噭╉毥?jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定合格后方可用于臨床研究。

　?。ㄋ模z測時應(yīng)采用雙盲或者單盲，陰性樣品和陽性樣品須在符合相關(guān)規(guī)定的檢測實驗室的實際評價條件下同時進行測定。

　　（五）核酸檢測試劑標本如血清或者唾液等，陽性數(shù)量分別不少于200份，同一類型陰性樣品不少于400份。

　?。γ嘎?lián)免疫診斷試劑，不同類型的陽性、陰性樣品均不少于400份。

　　（七）其他方法的SARS診斷試劑，不同類型的陽性、陰性樣品的數(shù)量均不得少于300份。

　?。ò耍z測數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析，以病程10天劃分，不同病程的病例（樣本）數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　六、其他

　　（一）SARS診斷試劑的生產(chǎn)研制必須符合《中華人民共和國傳染病防治法》的相關(guān)要求。

　　（二）產(chǎn)品使用說明書需明確標注試劑檢測的局限性。

　　（三）本技術(shù)要求將根據(jù)對SARS研究的進展情況適時進行修訂。

　　附件4：SARS病毒毒株資料登記表

　　一、病毒株名稱：

　　二、宿主情況：

　　- 病人姓名

　　- 病人年齡

　　- 病人性別

　　- 病人民族

　　- 病人家庭住址

　　- 發(fā)病地點

　　- 發(fā)病日期

　　- 收住入院日期

　　- 臨床確診日期

　　- 實驗室確診日期

　　- 病人病程

　　- 病人轉(zhuǎn)歸　　　死亡　　　痊愈　　　是否有后遺癥

　　- 病人密切接觸者病人數(shù)

　　- 毒株分離原樣本：

　　咽試子　　漱口液　　　痰液　　　血液　　　糞便　　　尸解標本的組織名稱

　　- 取樣日期

　　- 取樣時病人的病期

　　- 取樣地點

　　- 病人是否留有恢復(fù)期血清

　　如有：采血日期

　　血清量　　ml　　支

　　三、毒株分離過程

　　分離用細胞

　　細胞名稱

　　細胞代次

　　細胞來源

　　培養(yǎng)基名稱

　　分離用動物

　　動物名稱

　　動物品系

　　動物年齡

　　飼養(yǎng)條件

　　病毒分離傳代

　　樣品處理方法

　　首次盲傳確證病毒陽性代次

　　病毒確證檢定方法

　　每代培養(yǎng)天數(shù)

　　細胞是否產(chǎn)生病變

　　病變模式（如有請?zhí)峁┱掌?/p>

　　病毒滴度

　　滴定方法

　　四、毒種建立和保存

　　毒種存儲條件　　　-20℃　　　-40℃　　　 -60℃　　　-80℃

　　原始毒種代次

　　分裝毒種用容器名稱

　　分裝毒種用容器材料

　　分裝毒種用容器體積

　　毒種病毒滴度

　　毒種添加的保護劑

　　人白蛋白　　%

　　牛血清　　　%

　　其他保護劑

　　原始毒種批數(shù)量　　　ml　　　支

　　該株毒種的其他代次

　　數(shù)量　　　ml　　　支

　　如已凍干

　　寫明凍干條件

　　五、毒種的檢定

　　毒種的鑒別實驗

　　檢定方法

　　檢定日期

　　檢定結(jié)果

　　毒種的無菌試驗

　　檢定方法

　　檢定日期

　　檢定結(jié)果

　　毒種的序列測定

　　測定方案

　　測定方法

　　測定日期

　　實驗室名稱

　　測定結(jié)果

　　附：核酸序列圖

　　推導(dǎo)的氨基酸序列圖??

　　種系發(fā)生樹圖

　　六、分離病毒的P3實驗室

　　面積

　　所在地址

　　郵政編碼

　　電話

　　傳真

　　實驗室負責(zé)人姓名　　職稱　　　職務(wù)

　　E-mail：

　　手機

　　上級主管部門

　　負責(zé)人（簽章）